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血清沉淀大揭秘:沉淀類型與應(yīng)對策略

更新時間:2024-12-16瀏覽:209次

血清中含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì),包括各種蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機(jī)物等,其中一些物質(zhì)在特定的條件下容易形成沉淀。無論血清產(chǎn)地、品質(zhì)如何,血清凍融后產(chǎn)生沉淀是無法避免的,因此各類血清以及含有血清的產(chǎn)品都可能會產(chǎn)生沉淀。

 

血清沉淀類型

 

血清中的沉淀主要為兩類:

一類是絮狀沉淀,這是血清中的纖維蛋白原在解凍過程中轉(zhuǎn)化成纖維蛋白而形成的,絮狀物較大時肉眼可見。

 

圖片3.png

 

▲ 纖維蛋白絮狀沉淀

 

一類是白色顆粒樣沉淀,主要是血清中的磷酸鈣的析出。也有部分脂蛋白、膽固醇、冷凝集素、玻連蛋白、胎球蛋白等一些脂質(zhì)或蛋白質(zhì)析出。在顯微鏡下可呈現(xiàn)為黑點(diǎn)樣物質(zhì),有時會隨著液體晃動,因此常常與細(xì)胞碎片或細(xì)菌污染混淆。

 

如何去除血清沉淀

 

通過2000rpm 5min離心,取上清,即可去除大部分沉淀。但由于部分沉淀細(xì)小且在使用過程中可能繼續(xù)產(chǎn)生析出沉淀現(xiàn)象,因此很難wan全清除血清內(nèi)的沉淀。

不建議過濾去除沉淀,因為沉淀會很快堵住濾膜導(dǎo)致過濾效果下降。

 

如何減少血清沉淀產(chǎn)生

 

血清出現(xiàn)沉淀是和血清的品質(zhì)沒有必然關(guān)系,并不會影響細(xì)胞生長。然而過多的沉淀可能會妨礙實驗者對細(xì)胞的觀察,有時難以和微生物污染區(qū)分,影響實驗者對細(xì)胞狀態(tài)的判斷。

 

那么如何避免血清產(chǎn)生過多沉淀呢?造成沉淀過多產(chǎn)生的主要原因有熱滅活、長時37℃或室溫放置,反復(fù)凍融等。因此為了避免沉淀過多,應(yīng)當(dāng)正確使用和保存血清:

 

冰凍的血清使用前放2-8℃冰箱過夜融化

室溫或水浴融化將會加速沉淀的產(chǎn)生

融化后上下顛倒混勻,不要劇烈搖晃

解凍后盡快使用完

非必須不滅活

不要反復(fù)凍融

 

如何區(qū)分血清沉淀和污染

 

纖維蛋白絮狀沉淀有時會被誤認(rèn)為霉菌。鏡下觀察,纖維蛋白沉淀呈現(xiàn)透明絮狀,形態(tài)無規(guī)則。而霉菌形態(tài)較規(guī)則,有明顯的菌絲。二者還是比較容易分辨的。

 


 ▲ 左圖:血清沉淀  右圖:霉菌


                                  

磷酸鈣沉淀在鏡下為小黑點(diǎn),常與細(xì)菌混淆。細(xì)菌通常會在1-2天內(nèi)迅速增殖,導(dǎo)致培養(yǎng)基渾濁。而磷酸鈣沉淀在37℃會緩慢析出。將血清取樣空培養(yǎng)時,可以明顯看到黑色顆粒且可能隨培養(yǎng)時間增加而增多,該現(xiàn)象為高溫下析出增多現(xiàn)象并非污染,因此不建議采用空培養(yǎng)作為血清檢菌的方式。

 

若您確實對血清產(chǎn)品有污染疑慮,建議取少量血清涂布LB平板進(jìn)行檢菌。

 

總之,了解血清中沉淀物的類型和正確的處理方法是非常重要的。通過合理的處理和預(yù)防措施,可以有效地減少血清沉淀。


 

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